- 品名： TaKaRa 感受態細胞 E. coli HST16CR
- 品牌： TaKaRa
- 型號： 9131
- 產品詳情
- 規格參數
| ■ 制品內容E.coli HST16CR Competent Cells100 μl × 10pUC19 plasmid (0.1 ng/μl)10 μlSOC media*1 ml × 10 |
| *SOC Media: 2% Tryptone 0.5% Yeast extract 10 mM NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgSO410 mM MgCl2 20 mM Glucose |
| ■ 制品說明 |
| 感受態細胞是具有攝取外源DNA能力的受體菌，可攝取基因重組質粒等，是轉化時的重要工具。Takara在Hanahan’s method基礎上進行了改良，制備出的E. coli HST16CR Competent Cells。 E. coli HST16CR Competent Cells是以E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）為基礎，獲得的ColE1 ori的復制相關基因 pcnB缺失的具有高轉化效率的菌株。由于pcnB基因的缺失，能夠降低pUC系列載體的拷貝數，可有效用于難以克隆的含跨膜結構域蛋白質等、克隆基因對大腸桿菌生長有抑制作用的高拷貝載體克隆。 因為是以E. coli HST08 Premium Competent Cells為基礎，缺失外源甲基化DNA的基因群(mrr -mcrBC-hsdRMS )和mcrA，因此可用于甲基化DNA的克隆、基因組文庫構建和常規亞克隆。另外，使用pUC系列載體轉化時，可通過β-半乳糖苷酶的α-互補性，在培養基中添加X-gal進行藍白篩選，以篩選重組體。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside |
| ■ 細胞濃度 |
| 1-2×109 bacteria/ml |
| ■ Genotype |
| E. coli HST16 CR: ： F-, endA1 , supE44 , thi -1, recA 1, relA 1, gyrA 96, phoA ,Φ80d lacZ ΔM15,Δ（ lacZYA - argF ）U169 , Δ ( mrr - hsdRMS - mcrBC ), ΔmcrA ,ΔpcnB, λ- |
| ■ 保存 |
| -80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，轉化效率將會降低。此時，在使用前，請使用附帶的pUC19 對照質粒來確認細胞的轉化效率。不能液氮保存。 |
| ■ 質量標準 |
| [1] 轉化效率 轉化質粒載體時，轉入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于Amp+ 的L-plate進行篩選。 轉化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互補性 轉化pUC19 plasmid時，確認含100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出現藍色菌落。 |
| ■ 注意事項 |
| 1. 取出所需管數的感受態細胞后，搬運時請置于干冰/乙醇中。 |
| 2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (BD Code: 352059 或 352057，等)，但效率可能會降低。 |
| 3. 當使用100 μl感受態細胞時，加入不超過10 ng的高純度質粒DNA。增加DNA量轉化效率會降低。 |
| 4. 當改變感受態細胞使用體積或tube類型時，需要研討適當的反應條件。例如，當使用1.5 ml microcentrifuge tubes時，請42℃加熱60秒。 |
| 5. 可以使用L-broth 或φb-broth替代SOC培養基。此時，轉化效率可能會降低。 |
| ·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH調整pH到7.5，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 M KOH調整pH到7.5，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| ·L-plate: 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 M NaOH調整pH到7.5，添加agar到1.5%，加水使終體積為1 L，高壓滅菌。 |
| 6. 當加入X-Gal時，按照以下操作進行： 將 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。 |
| 7. 不建議將解凍的感受態細胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結不可避免，將細胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉化效率可能會降低至少一個數量級。 |
| E.coliHST16CRCompetentCells | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產品名稱 | 包裝量 |
| Takara | 9131 | E.coliHST16CRCompetentCells | 1Set(100μl×10支) |
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